高通量DSF分析儀在生物藥物研究、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，DSF，即差示掃描熒光法(Differential Scanning Fluorimetry)，是一種基于蛋白質(zhì)熱變性過(guò)程的熒光檢測(cè)方法。它通過(guò)在熒光定量PCR儀上緩慢加熱樣品，并在加熱過(guò)程中檢測(cè)熒光信號(hào)的變化來(lái)評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性。根據(jù)熒光信號(hào)來(lái)源的不同，DSF可以分為兩類：染料法和無(wú)標(biāo)記法(Nano DSF)。
 

　　染料法：常用的熒光染料是SYPRO Orange。這是一種環(huán)境敏感的疏水染料，當(dāng)溫度升高時(shí)，蛋白去折疊，疏水部分暴露出來(lái)，染料與蛋白質(zhì)的疏水部分特異性結(jié)合，導(dǎo)致熒光增強(qiáng)。通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度的變化，可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的熔解溫度(Tm)。
 

　　無(wú)標(biāo)記法(Nano DSF)：這種方法基于蛋白去折疊過(guò)程中色氨酸發(fā)射光譜的位移進(jìn)行檢測(cè)。色氨酸殘基在蛋白質(zhì)疏水內(nèi)核中時(shí)，其內(nèi)源熒光發(fā)射波長(zhǎng)較短；而當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)去折疊，色氨酸暴露于親水環(huán)境時(shí)，其內(nèi)源熒光發(fā)射波長(zhǎng)會(huì)發(fā)生紅移。通過(guò)監(jiān)測(cè)這種熒光變化，可以在非標(biāo)記環(huán)境下評(píng)估蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性。
 

　　高通量DSF分析儀結(jié)合了DSF技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，并實(shí)現(xiàn)了高通量分析。其主要特點(diǎn)包括：
 

　　高通量：采用標(biāo)準(zhǔn)的384微孔板，一次實(shí)驗(yàn)可以分析多個(gè)樣品，大大提高了分析效率。
 

　　快速分析：一個(gè)升溫過(guò)程(如60-80分鐘)內(nèi)即可完成384個(gè)樣品的穩(wěn)定性分析與篩選。
 

　　無(wú)需特殊耗材：使用標(biāo)準(zhǔn)的384孔板，無(wú)需特殊的耗材和毛細(xì)管，降低了實(shí)驗(yàn)成本。
 

　　內(nèi)源熒光檢測(cè)：Nano DSF方法無(wú)需對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行任何標(biāo)記，也無(wú)需使用任何熒光探針，即可快速測(cè)量整塊樣品微孔板。
 

　　高通量DSF分析儀在多個(gè)領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，包括但不限于：
 

　　蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析：評(píng)估蛋白質(zhì)在不同條件下的穩(wěn)定性，如溫度、pH值、離子強(qiáng)度等。這對(duì)于理解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系、優(yōu)化蛋白質(zhì)藥物的生產(chǎn)和儲(chǔ)存條件具有重要意義。
 

　　藥物篩選：通過(guò)高通量篩選技術(shù)，快速篩選出與靶蛋白結(jié)合的候選藥物。這有助于加速藥物研發(fā)進(jìn)程，提高藥物篩選的效率和準(zhǔn)確性。
 

　　蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究：研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象變化，為蛋白質(zhì)結(jié)晶等研究提供有力支持。DSF技術(shù)可以揭示蛋白質(zhì)在不同條件下的結(jié)構(gòu)變化，為理解蛋白質(zhì)的功能和機(jī)制提供重要線索。